2.將培養(yǎng)瓶放在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中推薦的溫度和CO2濃度下培養(yǎng)（大多數(shù)細(xì)胞系為37℃與5%CO2）直到細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。
3.取出大約10 ml運(yùn)輸培養(yǎng)基的上清液，并重懸細(xì)胞。將取出的運(yùn)輸培養(yǎng)基儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?/div>
4.無(wú)菌條件下，轉(zhuǎn)移懸浮細(xì)胞到25 cm2或75 cm2的培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶大小取決于細(xì)胞株（見(jiàn)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)）。
5.按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中推薦的溫度和CO2濃度培養(yǎng)細(xì)胞，直到細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。
原代ATCC細(xì)胞來(lái)源于一塊碎的或酶消化的組織。原代培養(yǎng)物，是多種類(lèi)型細(xì)胞的混合物，保留了其來(lái)源組織的特點(diǎn)。
一段時(shí)間后，原代培養(yǎng)的細(xì)胞會(huì)達(dá)到融合狀態(tài)，即在培養(yǎng)瓶中的所有可用空間由于細(xì)胞擴(kuò)增都被覆蓋。在此之后，ATCC細(xì)胞需要消化（通常用蛋白水解酶，如胰蛋白酶）為單個(gè)細(xì)胞并且傳代（分裂，傳代或轉(zhuǎn)移）。在*次傳代以后，培養(yǎng)物通常被稱(chēng)為一個(gè)細(xì)胞系。每一次傳代培養(yǎng)，細(xì)胞群體由于快速生長(zhǎng)的細(xì)胞占主導(dǎo)地位而變得更均勻。具有所需特性的細(xì)胞也可以通過(guò)克隆，從培養(yǎng)物中選出。
二倍體細(xì)胞很少可以倍增超過(guò)幾代。它們只有有限的復(fù)制能力，并且在細(xì)胞倍增20至80次后開(kāi)始減緩并zui終停止分裂。zui近的證據(jù)表明，某些細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞衰老與預(yù)計(jì)的復(fù)制性衰老不同，可能是由于不適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件導(dǎo)致的。還有其他數(shù)據(jù)顯示，對(duì)某些物種的細(xì)胞系（尤其是人源的）即使生長(zhǎng)在改進(jìn)的培養(yǎng)條件下仍存在復(fù)制衰老。這種衰老是由細(xì)胞分裂時(shí)染色體末端（端粒）縮短調(diào)控的。
相反，傳代（或永生化）細(xì)胞具有無(wú)限增殖能力。這些細(xì)胞系通過(guò)多種手段中的其中一種來(lái)使細(xì)胞永生化或轉(zhuǎn)化。許多傳代細(xì)胞來(lái)自腫瘤組織。ATCC收集的大部分細(xì)胞系是傳代的，只有少數(shù)如CCD-1117Sk人皮膚成纖維細(xì)胞（ATCC CRL-2465?）或CCD-18Co人結(jié)腸細(xì)胞（ATCC CRL-1459?）是有限傳代的。更多關(guān)于ATCC細(xì)胞永生化的信息可以在ATCC上查找。
正如以上提到的，細(xì)胞系要么在培養(yǎng)瓶表面貼壁生長(zhǎng)（錨定依賴(lài)性）要么懸浮生長(zhǎng)（非錨定依賴(lài)性）。ATCC細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂，通常遵循一個(gè)由四個(gè)階段組成的特征性增長(zhǎng)模式：停滯期，對(duì)數(shù)期（指數(shù)期），平穩(wěn)期（平臺(tái)期）和衰退期。
停滯期——將細(xì)胞接種至培養(yǎng)瓶之后，細(xì)胞逐步恢復(fù)的同時(shí)，緩慢生長(zhǎng)。
對(duì)數(shù)期（指數(shù)期）——細(xì)胞進(jìn)入一個(gè)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的時(shí)期，一直持續(xù)到整個(gè)生長(zhǎng)表面被占滿(mǎn)或細(xì)胞密度超過(guò)培養(yǎng)基提供營(yíng)養(yǎng)的能力。
平穩(wěn)期——細(xì)胞增殖減慢或停止。
衰退期——如果不更換培養(yǎng)基且細(xì)胞數(shù)量不減少，細(xì)胞活力會(huì)下降，并出現(xiàn)細(xì)胞死亡。
為了確保ATCC細(xì)胞活力，遺傳穩(wěn)定性和表型穩(wěn)定，必須使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)期。這意味著細(xì)胞需要在進(jìn)入平穩(wěn)增長(zhǎng)階段之前，或在單層細(xì)胞長(zhǎng)成100%融合之前，或在懸浮細(xì)胞達(dá)到推薦的zui大細(xì)胞密度之前定期進(jìn)行傳代培養(yǎng)。為每個(gè)細(xì)胞系繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)，對(duì)于測(cè)定該細(xì)胞系的生長(zhǎng)特性是必要的。
